Методика электрофоретического разделения групповых изоферментов ФГФ

Методика электрофоретического разделения групповых изоферментов ФГФ

Генетически обусловленный полиморфизм фосфогликолатфосфатазы (ФГФ) был впервые описан в 1978 г. R F Barker, D. A. Hopkinson Фермент играет большую роль в транспортном переносе кислорода гемоглобином эритроцитов крови человека, поскольку он непосредственно воздействует на 2,3-дифосфоглицерат, который в свою очередь обусловливает повышенное сродство гемоглобина к кислороду. К настоящему времени в генном локусе системы ФГФ обнаружено три кодоминантных аутосомальных гена ФГФ1, ФГФ2 и ФГФ3. Поскольку фореграммы всех гетерозиготных фенотипов ФГФ демонстрируют три изофермента, это доказывает димерную структуру белков фермента. Поскольку фореграммы всех гетерозиготных фенотипов ФГФ демонстрируют три изофермента, это доказывает димерную структуру белков фермента. Методика электрофоретического разделения групповых изоферментов ФГФ (по Barker, Hopkinson).

Удовлетворительного разделения изоферментов ФГФ до настоящего времени удалось достичь лишь при электрофорезе в крахмальном геле. Однако даже при использовании этого высокочувствительного метода четкого разделения групповых ее изоферментов достичь крайне трудно, но все же в большинстве случаев оно бывает достаточным для дифференцирования фенотипов фермента. Электродный буфер: 0,1 М трис, 0,1 М ангидрид малеиновой кислоты, 0,01 М ЭДТА (хелаплекс III) и 0,01 М MgCl2 доводят 40% раствором NaOH до pH 7,2. Гелевый буфер: электродный буфер в разведении 1 : 10. Крахмальный гель: приготовление обычное, однако в гелевый буфер добавляют 1,25 ммоль 2-меркаптоэтанола.

Прививка образцов: исследуемые гемолизаты наносят на кусочки фильтровальной бумаги Ватман No 17, которые вносят в ряд стартовых лунок, расположенный в 4 см от катодного края геля.

1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд (Еще не оценили)
Loading...

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Можно использовать следующие HTML-теги и атрибуты: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <strike> <strong>

Подтвердите, что Вы не бот — выберите самый большой кружок: